蛋白交互作用分析系統(tǒng)

品牌介紹：

ATTO株式會社成立于1964年，是日本zui大、世界zui著名的電泳廠商之一，具有完整的常規(guī)電泳產(chǎn)品系列。作為日本*的電泳品牌，ATTO一直秉承著“世界信賴的品質(zhì)”的精神，其產(chǎn)品憑借的精致和可靠的性能，具有了超越其他品牌產(chǎn)品的實(shí)力，成為小型電泳產(chǎn)品的。

ATTO株式會社同樣也是世界上zui早研制熒光發(fā)光儀器的廠家之一。隨著人類更深層次的探索生命的奧秘，熒光檢測已成為一種非常有效的手段。ATTO依托*的技術(shù)和強(qiáng)大的科研實(shí)力，連續(xù)開發(fā)出多款的熒光檢測儀器，在應(yīng)用上突破了傳統(tǒng)熒光儀器的局限性，把這項(xiàng)技術(shù)又提高到一個新的水平，滿足更高要求的科研工作要求。

蛋白交互作用分析系統(tǒng)

產(chǎn)品性能：

主要用于生物學(xué)領(lǐng)域的冷光和熒光檢測波長測定：如

FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）分子設(shè)計(jì)的調(diào)查

BRET（生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移）分子設(shè)計(jì)的調(diào)查

熒光/冷光試劑的發(fā)展和質(zhì)量控制

熒光/冷光反應(yīng)的分析

用途特征;

1． 分光功能；同時(shí)測定相同條件下的測量范圍內(nèi)不同波長的光

2． 一個冷CCD相機(jī)做為檢測器，通過調(diào)節(jié)曝光時(shí)間即可增加檢測靈敏度

LumiFL-Spectro capture用一個高靈敏度的冷CCD做檢測器，增加了靈敏度，同時(shí)有利于整個波長范圍內(nèi)的同時(shí)測量。這個單元是由光分離部分和檢測裝置做為基本結(jié)構(gòu)；同時(shí)，如果客戶需要測量的樣品是靠熒光激發(fā)的，還能連接熒光激發(fā)光源進(jìn)行測定（可選：請?jiān)谝笾凶⒚鳎?。熒光樣品的測定可以用石英材質(zhì)的容器，冷光樣品可以用塑料的小離心管。

硬件特征：

1、電子的冷CCD相機(jī)做為檢測器

2、CCD可以同時(shí)接收和檢測整個目標(biāo)波長范圍區(qū)的所有光

3、CCD比光電倍增管PMT有更高的量子效率

4、所有波長同時(shí)檢測，大大縮短了檢測時(shí)間

5、測定波長范圍：400-800nm

6、可以長時(shí)間曝光（提高了微小樣品的檢測靈敏度）

7、如果裝置熒光激發(fā)光源，還可以測定FRET或熒光底物

與常規(guī)的分光計(jì)比較如下：

要捕獲弱光波長內(nèi)的全部變化，必須要有測定小樣品的高靈敏度的檢測裝置。常規(guī)的光度計(jì)是在把光分散后采用光電倍增管（PMT）一個個的檢測，這樣的話，敏感度大大降低，同時(shí)可能會由于以下原因沒有達(dá)到一定光密度，導(dǎo)致樣品不能側(cè)定出光譜：

（1）PMT的定量效率本身就比CCD低

（2）測定時(shí)間短

更重要的是，如果為補(bǔ)償?shù)挽`敏度的不便而將掃描時(shí)間延長，冷光或熒光就會逐漸變細(xì)，反而得不償失，得不到精確的光譜。

樣品測量：

發(fā)光樣品——濾光片元件組——細(xì)縫元件組——衍射光譜——所有波長的光通過冷CCD成批量檢測

1．樣品可以在石英杯或者PCR管內(nèi)測定；冷光樣品（細(xì)胞或蛋白）都可以測

2．聚光鏡/濾光片：可以設(shè)定單片激發(fā)光濾片

3．細(xì)縫元件組：可以聚集樣品光

4．衍射光柵：分離樣品光

5．檢測元件：整個樣品的光被分離后的光譜可經(jīng)冷CCD同時(shí)測定；測量時(shí)間短，可以通過長時(shí)間曝光達(dá)到提高靈敏度的效果。

舉例：

BRET樣品的測定：

當(dāng)蟲熒光素加到藍(lán)色熒光素酶Vluc和黃色熒光蛋白YFP的融合蛋白上，熒光素和酶反應(yīng)產(chǎn)生能量。一部分能量轉(zhuǎn)移到Y(jié)FP上，BRET反應(yīng)就開始了。如果我們插入一小段包含目的序列（KR）的短肽片段，它可以轉(zhuǎn)運(yùn)酶PC1到Vluc-PC1這個復(fù)合蛋白上，識別并優(yōu)先結(jié)合YFP的肽鏈序列。用AB-1850測定這個融合物的光譜，460nm下的Vluc冷光和527nm下的YFP都發(fā)出了強(qiáng)光，這樣BRET反應(yīng)被有力地證實(shí)了。接下來，PC1加入反應(yīng)體系，527nm下的光減弱了，峰值變小。這個結(jié)果可以這樣解釋：PC1搶先結(jié)合到復(fù)合蛋白上，切斷了能量轉(zhuǎn)移到GFP上的通路，所以BRET的效率降低，通過檢測數(shù)量的降低可以檢測PC1的活性。

生物技術(shù)領(lǐng)域的用途：

BRET或FRET用途中的評估分子設(shè)計(jì)

為完成BRET或FRET的實(shí)驗(yàn)，首先需要預(yù)實(shí)驗(yàn)階段的檢驗(yàn)分子設(shè)計(jì)。這種情況下，用光學(xué)濾光片檢測冷光或熒光樣品不可能把樣品的全部發(fā)光波長都檢測到，同時(shí)也不能過有效而充分地檢測到能量轉(zhuǎn)移期間波長的變化。而如果用AB-1850，這些就不成問題了，可以有效地進(jìn)行分子設(shè)計(jì)。

BRET或FRET：zui近這兩種技術(shù)成為熱門，被廣泛應(yīng)用于分析蛋白間、蛋白和核酸間的，或者對蛋白進(jìn)行修飾、剪切和空間構(gòu)象改變后的功能研究。

FRET是一種現(xiàn)象，從激發(fā)熒光的分子（供體）產(chǎn)生的光能量激活了其它熒光分子（受體），從而受體發(fā)光。它一般發(fā)生在受體和供體間存在一定的距離和空間關(guān)系，通過測定發(fā)出的光的波長，就可以判斷FRET是否發(fā)生。

BRET 中，熒光分子（供體）被冷光分子所取代，光也不是由供體發(fā)出，而是受體被冷光分子的冷光激活。BRET 中，如果冷光底物在測定時(shí)加入，檢測就可以進(jìn)行了，所以不需要高能量的激發(fā)光源裝置。這樣就降低了對樣品的損傷。

性能參數(shù)：

1.冷光、熒光測定裝置

2.光譜成像：

衍射光柵數(shù)目：1個（標(biāo)準(zhǔn)）光柵：150pc/mm

Braze 波長：500nm

3.測量樣品部分：

測定器皿：石英杯（4mm*4mm）/ 0.2ml PCR管/ 35mm 培養(yǎng)皿

樣品體積：10ul-100ul

瞬時(shí)冷光測定：注入孔（硅酮隔板）

激發(fā)光源的連接：FC接管（標(biāo)配）

4.軟件：

功能：測量和光波數(shù)據(jù)分析

接口： USB2.0

5.體積和重量：

大?。?10mm（W）*725mm(D)*390mm（H）

重量：58kg            

電源：C100v  50/60Hz  290V

6.標(biāo)準(zhǔn)配件:

LumiFL-Spectro 光捕獲系統(tǒng)：1臺

35mm 平皿實(shí)驗(yàn)組區(qū)：1PC

方形細(xì)胞樣品區(qū)：1PC

PCR管樣品區(qū)：1

熒光測量時(shí)的濾鏡托板：1

AC繩：1

USB接線：1

瞬時(shí)熒光測定時(shí)需要用到的試劑加樣接管：1

石英容器：1

PCR管：1袋

為瞬時(shí)測定提供的試劑加樣橡膠閥：1袋

數(shù)據(jù)分析軟件（CD版）：1